
Tel.: (+385)1
45 73 070
Tel/Fax: (+385)1 45 73 071
OIB: 90875660944
E-mail: poliklinika.brazda@gmail.com
Na ovom mjestu mozete dobiti sve novosti i informacije vezane uz stručni dio rada laboratorija.
Za dijagnostiku Chlamydia trachomatis koristimo dvije metode;
prva je
DIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA S MONOKLONSKIM PROTUTIJELIMA - „
FLUOROTECT CHLAMYDIA “
1. NAČELA TESTA
Fluorotect Chlamydia je brza, in vitro metoda koja dopušta direktno bojanje kliničkog uzorka. Svi Chlamydia trachomatis serotipovi dijele zajednički antigen, tj. protein koji je smješten u vanjskoj membrani staničnog zida. Za detekciju tog antigena koriste se monoklonska protutijela obilježena fluorescentnom bojom (FITC). Obilježena protutijela FITC- om vežu se specifično za Chlamydia trachomatis ako je prisutna u metanol fiksiranom medicinskom uzorku prethodno nanešenom na jažicu predmetnog mikroskopskog stakla. Ispiranje puferom odstranjujemo FITC-om obilježena protutijela koja nisu vezana.
2. UZIMANJE UZORKA
a) cervikalni uzorak: trebaju sadržavati mnoštvo endocervikalnih epitelnih stanica koje mogu sadržavati Chlamydia trachomatis kao intracelularni organizam koji zaražava te stanice.
Prvo treba sa štapićem očistiti cervikalni kanal (odstraniti cervikalnu sluz; izbjegavati vrijeme ovulacije za uzorkovanje).
Potom uzorkovati dakronskim štapićem ili citološkom četkicom rotirajući u cervikalnom kanalu bez doticaja površine rodnice.
b) uretralni uzorak: također treba sadržavati epitelne stanice. Dakronski štapić uvedemo 2 do 4 cm i potom rotiramo. Važno je ne mokriti minimalno, sat vremena prije uzimanja uzorka (preporučljivo 4 sata).
Druga metoda dijagnosticiranja klamidije je
MOLEKULARNA METODA
detekcije –
1. NAČELA TESTA
Test se bazira na detekciji specifičnog dijela genoma mikroorganizma. Osjetljivost testa je povećana amplifikacijom signala, koji nastaje kod prisustva mikroorganizama u uzorku.
Hibridizacija, koja je osnova testa, proces je stvaranja tzv. RNA:DNA hibrida; ispitivanom uzorku dodaje se RNA – proba specifična za traženi mikroorganizam. Ukoliko je u uzorku prisutan, dolazi do vezanja RNA – probe i specifičnog dijela ciljne DNA. Nastali kompleks je tzv. RNA:DNA hibrid koji se detektira pomoću kemiluminiscentnog supstrata i luminometra.
2. UZIMANJE UZORKA
a) cervikalni uzorci: trebaju sadržavati mnoštvo endocervikalnih epitelnih stanica koje mogu sadržavati Chlamydia trachomatis kao intracelularni organizam koji zaražava te stanice.
Prvo treba sa štapićem očistiti cervikalni kanal, a potom uzorkovati dakronskim štapićem ili citološkom četkicom rotirajući u cervikalnom kanalu bez doticaja površine rodnice.
b) uretralni uzorak: također treba sadržavati epitelne stanice. Dakronski štapić uvedemo 2 do 4 cm i potom rotiramo. Važno je ne mokriti prije uzimanja uzorka ( preporučljivo 4 sata ).
Set za uzimanje uzoraka ovom metodom se zove HYBRID CAPTURE (HC) CERVICAL SAMPLER.
Mikoplazme su mikroorganizmi koji koloniziraju urogenitalni trakt i njihovim umnožavanjem se stvaraju uvjeti za razvoj bolesti.
Ureaplasma urealyticum
a) MUŠKARAC: Kod muškaraca uglavnom izaziva uretritis (Ureaplasma urealyticum je drugi po redu, uzročnik negonokoknog uretritisa).
Osim uretritisa, može izazvati prostatitis i epididimitis.
b) ŽENA: Kod trudnica može izazvati korioamnionitis, rupturu plodnih ovoja i poremećaj tijeka trudnoće.
Mycoplasma hominis
c) ŽENA: izaziva endometritis i salpingitis, a može biti povezana i s nespecifičnim vaginitisom.
d) Obje vrste mogu uzrokovati neonatalne infekcije (meningitis, septikemije, infekcije respiratornog trakta).
Obzirom da oba mikroorganizma mogu biti patogeni i bakterije koje koloniziraju urogenitalni trakt, kvantifikacija je neophodna kao pomoć u interpretaciji nalaza odraslih.
NAČELO TESTA
Metoda dijagnosticiranja koju koristimo je kultivacija u bujonu. Porast u kulturi detektira se promjenom boje indikatora, što je posljedica metabolizma mikroorganizama.
Test omogućuje identifikaciju (Ureaplasma urealyticum i Mycoplasma hominis) i titraciju tj. određivanje količine mikroorganizama u uzorku.
Test ujedno uključuje i ispitivanje osjetljivosti bakterijskog izolata na odgovarajuće antimikrobne lijekove.
UZIMANJE UZORKA
a) cervikalni uzorak: odnosi se na obrisak endocerviksa; uzorak mora sadržavati stanične elemente, jer su mikoplazme epicelularni mikroorganizmi, na površini stanice.
Najprije treba štapićem očistiti cervikalni kanal (odstraniti sluz i floru rodnice), a potom uzeti uzorak za analizu.
b) uretralni uzorak: također treba sadržavati epitelne stanice. Štapić uvedemo 2 do 4 cm i potom rotiramo. Važno je ne mokriti barem sat vremena prije uzimanja uzorka (preporučljivo 4 sata).
Ukoliko se istovremeno uzimaju uzorci za analizu „na mikoplazme“ i „na klamidiju“, tada treba najprije uzeti uzorak za mikoplazme, a potom za klamidiju.
Uzorak za mikoplazme se odmah nakon uzimanja inokulira u tekući transportni medij (bočica sa zelenim čepom) koji se čuva u hladnjaku do 72 h (+4ºC) ili do 6 mj. u zamrzivaču (-20ºC ).
4. Humani papillomavirus (HPV)
Metoda dijagnosticiranja je
MOLEKULARNA METODA
detekcije –
DIGENE Hybrid Capture II.
1. NAČELA TESTA
Test se bazira na detekciji specifičnog dijela genoma mikroorganizma.
Osjetljivost testa je povećana amplifikacijom signala, koji nastaje kod prisustva mikroorganizama u uzorku.
Hibridizacija, koja je osnova testa, proces je stvaranja tzv. RNA:DNA hibrida; ispitivanom uzorku dodaje se RNA – proba specifična za traženi mikroorganizam. Ukoliko je u uzorku prisutan, dolazi do vezanja RNA – probe i specifičnog dijela ciljne DNA. Nastali kompleks je tzv. RNA:DNA hibrid koji se detektira pomoću kemiluminiscentnog supstrata i luminometra.
Ovom metodom možemo detektirati i diferencirati HPV tipove niskog rizika ( 6/11/42/43/44) i HPV tipove visokog rizika ( 16/18/31/33/35/39/45/51/52/56/58/59/68).
2. UZIMANJE UZORKA
a) cervikalni uzorci: trebaju sadržavati mnoštvo endocervikalnih epitelnih stanica koje mogu sadržavati HPV kao intacelularni organizam koji zaražava te stanice.
Prvo treba sa štapićem očistiti cervikalni kanal, a potom uzorkovati dakronskim štapićem ili citološkom četkicom rotirajući u cervikalnom kanalu bez doticaja površine rodnice.
b) uretralni uzorak: također treba sadržavati epitelne stanice. Dakronski štapić uvedemo 2 do 4 cm i potom rotiramo. Važno je ne mokriti prije uzimanja uzorka (preporučljivo 4 sata).
Set za uzimanje uzoraka ovom metodom se zove HYBRID CAPTURE (HC) CERVICAL SAMPLER.
Uzimanje uzorka
a) cervikalni uzorci: trebaju sadržavati mnoštvo endocervikalnih epitelnih stanica koje mogu sadržavati HPV kao intacelularni organizam koji zaražava te stanice.
Prvo treba sa štapićem očistiti cervikalni kanal, a potom uzorkovati dakronskim štapićem ili citološkom četkicom rotirajući u cervikalnom kanalu bez doticaja površine rodnice.
b) uretralni uzorak: također treba sadržavati epitelne stanice. Dakronski štapić uvedemo 2 do 4 cm i potom rotiramo. Važno je ne mokriti prije uzimanja uzorka (preporučljivo 4 sata).
Set za uzimanje uzoraka ovom metodom se zove HYBRID CAPTURE (HC) CERVICAL SAMPLER.Napomena:
Uzorak za Papa test uzeti prije uzimanja uzorka za DNA testiranje.
Ako se provodi kolposkopija, uzorak za DNA testiranje uzeti prije nanošenja octene kiseline ili jodnih pripravaka na vrat maternice.
1. Odstraniti višak mukoze s osi cerviksa i oko ektocerviksa pomoću vate ili dakrona.
2. Uvesti četkicu 1-1,5 cm u os cerviksa tako da zadnji kraj četkice dodiruje ektocerviks ( slika A )
![]() |
| A |
Okrenuti 3 puna kruga u smjeru suprotno od smjera kazaljke na satu.
ČETKICU NE UVODITI POTPUNO U CERVIKALNI KANAL!
3. Četkicu izvaditi iz cervikalnog kanala. Izbjegavati dodir četkice s okolinom do stavljanja u spremnik za transport.
4. Četkicu s brisom staviti do dna u spremnik s transportnim medijem. Štapić prekinuti ( slika B ) i dobro zatvoriti čepom ( slika C )
![]() |
![]() |
| B | C |
Upute za skladištenje
Čuvati spremnike s uzorcima na temperaturi od 15-30 0C. Ne upotrebljavati nakon isteka roka valjanosti.
Prijenos uzoraka
Spremnici s uzorcima mogu se čuvati 2 tjedna na sobnoj temperaturi i poslati u laboratorij bez hladnjaka. Nakon prijema u laboratorij moguće je čuvati uzorke na temperaturi 2 - 8 0C najviše 1 tjedan do izvođenja testa. Ako se testiranje ne izvodi unutar 1 tjedna, uzorci se mogu čuvati na temperaturi -20 0C do 3 mjeseca prije izvođenja testa.
- upotrijebiti bris s drvenim štapićem (veća pamučna glava)
- nije potrebno prethodno vlaženje glave štapića sterilnom fiziološkom otopinom
- bolesniku obrisati tonzile, nepčane lukove i stražnji zid ždrijela ne dodirujući bukalnu sluznicu i jezik. Jezik mora cijelo vrijeme biti u ustima pritisnut spatulom.
POHRANA: < od 2 sata - sobna temperatura
> od 2 sata – temp. hladnjaka (+4 C )
NAJČEŠĆA
GREŠKA:
- pamučnom
glavom štapića dotaknuti jezik ili bukalnu sluznicu
- upotrijebiti bris sa žicom (manja pamučna glava)
- navlažiti glavu štapića sterilnom fiziološkom otopinom neposredno prije uzimanja uzorka
- drugim brisom (koji će biti odbačen) očistiti vestibulum nosa
- obrisak uzeti u onoj strani nosa (L / D) koja nije začepljena, tj. ići onim putem koji je prohodan i nije edematozan
- bolesniku naredimo disanje na usta, a ne na nos
- jednom rukom fiksiramo glavu bolesnika tako da palcem podižemo i držimo vrh nosa, a ostalim prstima i dlanom držimo čelo i frontalni dio tjemena
- drugom rukom ulazimo sa štapićem u prohodnu nosnicu i rotirajući štapić po uzdužnoj osovini, prolazimo donjim nosnim hodnikom uz septum sve do nazofarinksa. Tamo se zadržimo oko 5 sekundi tako da glava brisa upije sekret. Prilikom opisane manipulacije ne smijemo dodirnuti sluznicu vestibuluma nosa. U protivnom treba ponoviti postupak novim neupotrebljenim štapićem.
POHRANA: < od 2 sata - sobna temperatura
> od 2 sata - temp. hladnjaka ( +4 C )
( N. meningitidis i
H. influenzae neće
preživjeti temperaturu hladnjaka, pa se preporuča, ukoliko ne
postoji mogućnost dostave uzorka unutar 2 sata, bris UBOSTI u
transportni medij i pohraniti na SOBNOJ temperaturi. )
Transportni medij osigurava preživljavanje potencijalnih patogena
približno 48 sati, na sobnoj temperaturi.
NAJČEŠĆE GREŠKE:
- uzeti obrisak vestibuluma nosa
- uzeti obrisak suhom pamučnom glavom brisa (to je teže subjektivno za bolesnika, a teže prežive mikroorganizmi do dolaska u laboratorij)
- pohraniti uzorak u hladnjak, a očekuje se N. meningitidis ili H. influenzae
- upotrijebiti štapić sa žicom (manja pamučna glava)
- navlažiti glavu brisa sterilnom fiziološkom otopinom neposredno prije uzimanja uzorka
- kružnim pokretima obrisati cijeli vestibulum (krila nosnica i septum)
-
indiciran je samo kod detekcije stafilokoknog nosnog kliconoštva (osobito
MRSA – meticilin rezistentni
Staphylococcus aureus)
- apsolutno je neprihvatljiv kod obrade respiratornog infekta!
POHRANA: < od 2 sata - sobna temperatura
> od 2 sata – temp. hladnjaka ( +4 C )
NAJČEŠĆA
GREŠKA:
- površno, nedovoljno temeljito, obrisana sluznica
- uzeti obrisak nazofarinksa, a ne obrisak vestibuluma nosa
- uvijek treba uzeti obrisak zdravog i bolesnog oka (konjunktive) – radi komparacije nalaza
- upotrijebiti štapić sa žicom (manja pamučna glava)
- ako želimo učiniti pretragu na Chlamyidia-u trachomatis - upotrijebiti SUHI DAKRONSKI ŠTAPIĆ. Energično obrisati konjunktivalni prostor da dobijemo STANICE. Tako uzeti uzorak odmah nanijeti (razmazati, natapkati) na prikladni „ set “ - pretmetno stakalce namijenjeno samo za tu pretragu
- osušiti i preliti fiksatorom (metanol) koji se nalazi u popratnoj plastičnoj ampuli.
- nakon što preliveni fiksator ishlapi – uzorak pohraniti u hladnjak (+4 C)
- ako želimo učiniti pretragu na ostale potencijalne bakterijske uzročnike – upotrijebit ćemo NAVLAŽENI štapić s pamučnom glavom (navlažiti sterilnom fiziološkom otopinom)
- jednom rukom rastvoriti vjeđu, a drugom rukom obrisati konjunktivalni prostor
- tako dobiveni uzorak uroniti u transportni medij i pohraniti na SOBNOJ temperaturi
- odmah dostaviti u laboratorij
Ukoliko radimo obje vrste obrisaka – tada PRVO uzimamo obrisak za „ klamidiju “ - (SUHI DAKRONSKI BRIS), a ZATIM obrisak ostalih potencijalne bakterijske patogene - (VLAŽNI BRIS)
NAJČEŠĆE GREŠKE:
- uzeti brisom sekret nakupljen u medijalnom uglu oka, jer je to obično sekret koji sadrži samo kolonizante, a ne potencijalne patogene, ili je to samo stanični detritus, pa će rezultat analize biti lažno sterilan
- zanemariti redoslijed uzimanja obrisaka „za klamidiju“ i za „bakteriološku“ analizu
- lokalno anestezirati površinu oka kapljicama anestetika
- sterilnim instrumentom ili suhim brisom sastrugati leziju (rožnice)
- kad tražimo Chlamydia-u trachomatis, sadržaj strugotine nanosimo na predmetno stakalce iz seta „za klamidiju“ i nakon sušenja prelijemo fiksatorom iz popratne plastične ampule. Osušeni uzorak pohraniti u hladnjak (+4 C) .
- uzorak uzet brisom s pamučnom glavom odmah se uroni u transportni medij i pohrani na sobnoj temperaturi – ukoliko se traže drugi potencijalni bakterijski uzročnici.
- namočiti sterilnom fiziološkom otopinim 2-3 brisa s drvenim štapićem (veća pamučna glava) i jedan bris sa žicom (manja pamučna glava).
-
bris
s manjom glavom bit će upotrijebljen za definitivan obrisak (uzorak)
- nakon 2-3 brisanja zvukovoda, debljim brisevima, navlaženim sterilnom fiziološkom otopinom (improvizirana toaleta zvukovoda) - tanjim brisom uzeti uzorak s bolesnog mjesta; energično i efikasno da se blagim brisanjem ne „previdi“ uzročnik streptokoknog celulitisa (ßHS „A“)
- da bi se izbjegla kontaminacija uzorka s bakterijama s okolne kože – može se upotrijebiti i ušni ORL-spekulum
POHRANA : < od 2 sata – sobna temperatura
> od 2 sata – temp. hladnjaka (+4 C)
NAJČEŠĆE
GREŠKE :
- uzeti prvi ili drugi obrisak kao definitivni uzorak (rezultat analize će biti fiziološka flora kože zvukovoda, a potencijalni patogen će se tako previdjeti)
- uporabiti ovu vrstu uzorka kao uzorak izbora kod sumnje na „otitis media“-u (zbog postojanja bubnjića kao fiziološke barijere, nećemo dobiti analizom potencijalnog uzročnika upale srednjeg uha)
- prije zahvata obvezno je učiniti toaletu zvukovoda vodom i sapunom ili odgovarajućim dezinficijensom za pranje, te potom isprati zvukovod sterilnom fiziološkom otopinom, radi ispiranja dezinficijensa
- (ovaj zahvat podrazumijeva intaktan bubnjić)
- sadržaj dobiven punkcijom zadržati u ŠTRCALJKI (čuvajući na sobnoj temperaturi) ILI inokulirati u odgovarajuću „FAN-BOČICU“ („žuti čep“)*, te je pohraniti na sobnu temperaturu ili u u termostat (37ºC)
- prije inokulacije sadržaja u „fan-bočicu“ potrebno je:
1. skinuti originalni plastični poklopac
2. dezinficirati 70%-tnim alkoholom gumu na vrhu bočice i PRIČEKATI da alkohol ISHLAPI. Tek je tada izvršena dezinfekcija.
3. sterilnom iglom (neupotrebljenom) inokulirati sadržaj u „fan-bočicu“
4. ponovo dezinficirati gumu alkoholom
5. pohraniti „fan-bočicu“ u termostat (37ºC) ili na sobnu temperaturu do transporta u mikrobiološki laboratorij
*FAN – bočica je tvornički naziv za tekuću podlogu.
Različita svojstva
tekućih podloga označena
su različitim bojama (npr. zeleni, narančasti, žuti čep).
Različiti
su optimalni volumeni tekućeg uzorka :
„žuti fan“ < 0,5 ml;
„narančasti fan“ i
„zeleni fan“ < 5 ml.
- uzorak uzeti ujutro, neposredno nakon buđenja
- usnu šupljinu isprati SAMO OBIČNOM vodom, bez pranja kalodontom i bez ispiranja dezinficijensom ili drugim sredstvom
- zatražiti od bolesnika da DUBOKO UDAHNE, te da potom ISKAŠLJE IZ DUBINE
- uzorak pohraniti u sterilni plastičnu bočicu sa širokim grlom, čuvajući ga na sobnoj temperaturi (do 2 sata) ili u hladnjaku (dulje od 2 sata) – (meningokok! i hemofilus! – sobna temperatura )
-
RETRONAZALNI SEKRET i ISPLJUVAK – nije dobar uzorak, pa se preporuča
dati uzorak pod nadzorom liječnika ili sestre
NAJČEŠĆA GREŠKA:
- uzeti ispljuvak umjesto iskašljaj
- uzeti retronazalni sekret kao uzorak
- prati zube ili dezinficirati tj. osvježavati usnu šupljinu nekim antiseptičkim sredstvom prije uzimanja uzorka
- uzorak pohraniti u sterilnu posudu i čuvati na SOBNOJ temperaturi ( ako je vrijeme čekanja do transporta uzorka veće od 2 sata, uzorak se može pohraniti i u HLADNJAK, ALI samo UKOLIKO NE OČEKUJEMO H. influenzae ili N. meningitidis ili anaeroba)
-
ANAEROBNI MIKROORGANIZAM
iz ovih uzoraka ne treba očekivati, ako je uzorak uzet bez
dvoluminalnog katetera („zaštićeni uzorak“), jer
anaerob neće preživjeti
kontakt s kisikom iz
zraka
-
tako
zaštićeni uzorak dostaviti u anaerobnom transportnom sistemu ili u
štrcaljki, pohranjujući ga pritom isključivo na sobnoj
temperaturi
- 70 %-tnim alkoholom dezinficirati kožu
- pričekati da alkohol ishlapi
- punktirati
-
punktat se ne preporuča pohranjivati u hladnjak, zbog očuvanja
vitalnosti termolabilnih mikroorganizama
- transkutanu punkciju izvoditi bez prethodne dezinfekcije kože
- nakon dezinfekcije kože nesterilno palpirati mjesto punkcije
- započeti punkciju prije nego što je alkohol ishlapio
- - očekivati uspješnu analizu, a u „fan“ – bočicu je inokulirana premalena količina uzorka
- sadržaj dostaviti u štrcaljki (kraće od 2 sata – na sobnoj temperaturi) ili aseptički inokulirati u odgovarajući „fan“ (dulje od 2 sata do dostave u mikrobiološki laboratorij)
- UKOLIKO POSTOJI EKSUDAT – odstraniti ga u cijelosti mehanički (sterilnim tupferom) i učiniti toaletu rane antiseptikom, koji potom OBVEZNO treba isprati sterilnom fiziološkom otopinom
-
UKOLIKO NE POSTOJI EKSUDAT – učiniti toaletu
rane, te obilno isprati
sterilnom fiziološkom otopinom
-
aspirirati špricom i iglom (uz pomoć
sterilne fiziološke otopine ili bez nje) sekret iz tkiva
-
pohraniti na sobnoj temperaturi, u štrcaljki
(kraće od 2 sata)
-
pohraniti na sobnoj temperaturi ili u
termostatu, u odgovarajućem „fanu“ (dulje od 2 sata)
Ne
preporuča se uzimati OBRISAK
RANE!!! - ovaj uzorak detektira kolonizacijsku floru (slučajni
„stanovnici“), a ne pravog uzročnika upale!
Iz istog
se razloga NE preporuča uzimati uzorak BEZ
PRETHODNE TOALETE.
Takav uzorak osim što detektira kolonizante, nije prihvatljiv, jer
se iz staničnog detritusa neće moći izolirati (kultivirati)
mikroorganizam, pa će rezultat analize glasiti „sterilno“, što ne
znači da je to zaista točno mikrobiološko stanje na mjestu upale.
Ukoliko
se ipak uzme obrisak, tada treba uzeti dva ( 2 ) obriska, jer će
jedan biti upotrijebljen za izradu mikroskopskog preparata koji će
dati informaciju o prisustvu leukocita - polimorfonukleara; ukoliko
leukociti nisu prisutni, tada je svaki mikrobiološki izolat zapravo
samo kolonizacijska flora.
Obrisak treba uzeti na mjestu koje se nakon toalete rane
antiseptikom još ispere i fiziološkom otopinom, da bi
se isprao antiseptik i tako eliminirala mogućnost dobivanja
lažno sterilnog rezultata.
(pleuralna,
perikardijalna, peritonealna, zglobna, amnionska i sl.)
- sadržaj dobivan punkcijom aseptički inokulirati u odgovarajući „fan“ - ovisno o volumenu sadržaja
- „fan“ pohraniti na sobnoj temperaturi ili u termostatu na 37ºC
- punkcijom dobiveni sadržaj može se ostaviti i u štrcaljki na sobnoj temperaturi u slučaju brze dostave (manje od 2 sata)
„set hemokultura“ je uzorak krvi dobiven s jednog mjesta venepunkcije, bez obzira inokuliramo li tu krv u jednu ili više bočica
PREPORUKA:
Maksimalno uzeti 3 seta u 24 sata.
U
slučaju febriliteta: 2-3 seta / 24 sata.
U
slučaju sumnje na endokarditis: 3 seta / 24 sata.
Preporučeni razmak venepunkcija > 1 sat.
- dezinficirati mjesto venepunkcije 70%-tnim alkoholom, te PRIČEKATI DA ALKOHOL ISHLAPI
(NE PALPIRATI KOŽU NAD VENOM NAKON IZVRŠENE DEZINFEKCIJE)
- skinuti originalni plastični poklopac s „fanova“ (bočica)
- dezinficirati gumeni vrh (čep) na „fanovima“ te PRIČEKATI DA ALKOHOL ISHLAPI
- u svaki „fan“ inokulirati uzorak krvi NEUPOTREBLJENOM, STERILNOM IGLOM
PREPORUKA:
Optimalni volumen krvi je drukčiji za različite vrste „fanova“:
·
ZELENI
ili NARANČASTI :
5-10 ml / bočici
·
ŽUTI : < 5 ml / bočici
POHRANA: NEINOKULIRANI, neupotrebljeni FAN - sobna temperatura
INOKULIRANI FAN (s uzorkom) :
< 2 sata - sobna temperatura
> 2 sata - termostat
NAJČEŠĆE GREŠKE:
- nismo pričekali da ALKOHOL ISHLAPI, prilikom dezinfekcije gumenog čepa „fana“ ili prilikom dezinfekcije mjesta venepunkcije
- palpirana je vena nakon dezinfekcije, a prije venepunkcije
- dezinficirati kožu oko katetera 70%-tnim alkoholom
- pričekati da alkohol ISHLAPI
- aseptički izvući kateter
- sterilnim škarama odrezati distalni kraj katetera (max. duljina 5 cm)
- odložiti ga u sterilnu posudu (npr. bočica za urin ili sterilna epruveta sa čepom)
-
KATETER NE UBADATI U TRANSPORTNI MEDIJ. Tako dobivamo neodgovarajući
rezultat.
POHRANA: < 15 min – sobna temperatura
>15 min < 24 sata – temp. hladnjaka ( +4°C )
NAJČEŠĆA GREŠKA :
- kateter je uboden u transportni medij i tako dostavljen u laboratorij
- komadić tkiva uzetog iz primarno sterilnog medija odložiti u sterilnu posudu, u koju je prethodno aseptički naliven odgovarajući volumen sterilne fiziološke otopine (da bi se spriječila dehidracija)
- ukoliko se očekuju ANAEROBI, tkivo treba uroniti u transportni medij
POHRANA : < 2 sata : sobna temperatura (što hitnija dostava)
> 2 sata : temp. hladnjaka (+4°C) – IZBJEGAVATI
- učiniti toaletu („debridman“), čime se mora odstraniti nekrotično tkivo i kontaminirani ili kolonizirani sekret
- isprati sterilnom fiziološkom otopinom
- odložiti u sterilnu posudu s dodanom sterilnom fiziološkom otopinom
- antiseptikom učiniti toaletu
- obilno isprati sterilnom fiziološkom otopinom, da se otplavi antiseptik
- aseptički učiniti bioptat
- odložiti u sterilnu posudu s dodanom sterilnom fiziološkom otopinom
3.
stomatološki bioptat
- antiseptikom učiniti toaletu usne šupljine
- obilno isprati mjesto uzimanja uzorka sterilnom fiziološkom otopinom, da se otplavi antiseptik
- sterilnim instrumentom (papirni štapić – paper point – gutapercha) sastrugati komadić tkiva i ODMAH ga inokulirati u transportni medij (potencijalni patogeni su anaerobi!!!)
- OBVEZNO pohraniti na sobnoj temperaturi
NAJČEŠĆE GREŠKE:
- tkivo nije čuvano inokulirano u transportni medij na sobnoj temperaturi, a očekuju se anaerobi
- tkivo je odloženo u sterilnu posudu bez dodatka sterilne fiziološke otopine te je dehidrirano dostavljeno u laboratorij
- dezinficirati kožu mjesta punkcije
- dobiveni likvor inokulirati u STERILNU EPRUVETU (zatvoriti je originalnim čepom ) i na HRANJIVE PODLOGE: kruta i tekuća (u / na svaku vrstu podloge inokulirati 20-ak kapi likvora)
POHRANA :
- - IZBJEGAVATI ODLOŽENU DOSTAVU !
- - DOSTAVITI U RUCI DOSTAVLJAČA, jer se ne smije dopustiti da se likvor ohladi! Do trenutka dostave, ev. pohraniti uzorak u termostat.
NAJČEŠĆE GREŠKE:
- likvor nije inokuliran u sterilnu epruvetu – bez dodataka za biokemijske pretrage
- likvor je dostavljen ohlađen ispod temperature tijela
- likvor nije čuvan do dostave u termostatu
ŽELUČANI
SADRŽAJ (
„aspirat želuca“ )
- to je sadržaj dobiven oro- ili nazo-gastričnom sondom (i / ili uz instilaciju sterilne fiziološke otopine – lavat)
- uzorak se uzima rano ujutro prije prvog obroka bolesnika i prije njegova ustajanja
POHRANA: < 2 sata – sobna temperatura
> 2 sata - temp. hlanjaka ( +4°C )
- uzeti stolicu veličine dva graška i odložiti u sterilnu posudu (posuda s navojem i žličicom)
-
bitno je uzeti
PRAVILNU KOLIČINU stolice, jer je samo za virološku obradu neophodan
1 gram!!!
- treba naročito izabrati i eventualno krvavavo-sluzave dijelove stolice
-
preporuča se uzeti
2-3 uzorka stolice sakupljana tijekom 2-3 dana –
za bakteriološku obradu
te 3-4 uzorka tijekom 10-ak dana –
za parazitološku
obradu
POHRANA: < 2 sata : sobna temperatura
> 2 sata : temperatura hladnjaka (+4°C)
NAJČEŠĆE GREŠKE:
- dostavljena je premalena količina stolice, a očekuje se bakteriološka, parazitološka i virološka analiza!!!
- naziv „koprokultura“ je naziv za posebnu parazitološku analizu, a ne za bakteriološku analizu
- dostavljen je 1 (jedan) uzorak stolice, a očekuje se parazitološka analiza
- dostavljena su 3 (tri) uzorka stolice za parazitološku analizu, ali uzorci nisu sakupljani tijekom minimalno 10-ak dana, nego dan za danom ili je stolica dobivena jednom defekacijom podijeljena u 3 (tri) posudice za stolicu
- kod kontrole bakterijskog kliconoštva nisu se pravili razmaci od minimalno tjedan dana, između davanja pojedinog uzorka stolice, nego su dostavljeni uzorci uzimani dan za danom ili je stolica dobivana jednom defekacijom podijeljena u tri različite posudice!
- očekivati uspješnu analizu „na Enterobius vermicularis“ iz uzorka stolice
-
ovaj uzorak uzeti samo
iznimno, ukoliko se ne može dobiti uzorak stolice
- bris uvesti kroz analni otvor, analnim kanalom „ići“ prema rektumu (3-5 cm duboko). Tamo bris zadržati i rotirati da se upije sekret u vatu glave brisa
- na pravilno uzetom uzorku, moraju se vidjeti čestice stolice na glavi brisa
- uzeti obrisak inokulirati u transportni medij
POHRANA: < 2 sata : sobna temperatura
> 2 sata : temperatura hladnjaka ( +4°C )
NAJČEŠĆE GREŠKE:
- dostavljen je „suhi bris“ - bez inokulacije u transportni medij
- od ovog se uzorka „puno očekuje“, u smislu dobivenih rezultata mikrobiološke pretrage
- ujutro, prije higijene i defekacije – ljepljivu traku s predmetnog stakalca nalijepiti na analni otvor uz pritisak jagodice prsta
-
potom, ljepljivu traku nalijepiti
natrag na predmetno stakalce
- ovim postupkom zalijepimo jajašca Enterobius vermicularis-a s anusa, ukoliko su odložena u toku noći te prisutna u perianalnom području
-
preporuča se ponavljati ovaj
postupak 3-5 jutara (3-5 uzoraka) tijekom 10-ak dana, jer se
paraziti ne izlučuju kontinuirano, nego sporadično. Stolica nije
dobar uzorak, ukoliko se traži prisustvo
Enterobius vermicularis-a.
POHRANA: sobna temperatura ili temperatura hladnjaka
NAJČEŠĆE GREŠKE:
- uzorak nije uziman prije izvođenja higijene i/ili defekacije
-
večer prije uzimanja uzorka – analni
je otvor tretiran nekom njegujućom kremom
- nije uzimano nekoliko analnih otisaka tijekom 10-ak dana, nego se dobar rezultat očekuje od jednog uzorka
- dostavi se stolica, a očekuje se Enterobius vermicularis !!!
- spolovilo, kao i cijelu anogenitalnu regiju, oprati nekoliko puta sapunom i vodom. Ova higijena mora biti „hiperhigijena“ u odnosu na uobičajenu higijenu.
- apstinirati od mokrenja min. 4 sata, ukoliko je moguće; najbolje je uzeti prvi jutarnji urin, jer je najkoncentriraniji
- razmaknuti labije / povući prepucij prema tijelu
- prvi mlaz intenzivno ispustiti (izmokriti) – time se „ispere“ distalna uretra, čime se odstranjuju bakterije koje su sastavni dio fiziološke flore
- ne prekidajući mokrenje – uhvatiti „srednji“ mlaz u sterilnu posudu. Pri tome paziti da se ne mokri po prstima, kao ni po sluznici ili koži spolovila
- izmokriti se slobodno do kraja ne „hvatajući“ urin u posudu
-
ZAGAĐENI
URIN : je urin „prvog“ mlaza, kao i urin dobiven bez
prethodne „hiperhigijene“. Ovakav urin sadrži bakterije koje
normalno obitavaju u području anogenitalne regije, a sastavni su dio
fiziološke flore kože, sluznice, distalne uretre i debelog crijeva.
Iz zagađenog uzorka nije moguće izvršiti mikrobiološku analizu.
NAJČEŠĆE GREŠKE :
-
uzorak je uziman bez prethodne
temeljite „hiperhigijene“
spolovila
-
prilikom mokrenja nisu bile
razmaknute velike usne (labije), tj. povučena koža spolovila (prepucij)
- pa je urin tekao po
koži i sluznici spolovila
- prilikom mokrenja urin je tekao po prstima kojima držimo spolovilo
- uzimanje urina u bočicu – je započeto prerano – nije dovoljno dugo „pušten prvi mlaz“ - pa nije isprana distalna uretra
- bočica za urin je hotimično ili nehotično otvarana satima / danima prije akta uzimanja uzorka
-
poklopac bočice ili unutrašnja strana
bočice je - dirana prstima
- do dostave je urin bio pohranjen izvan temperature hladnjaka, a prošlo je više od 2 ( dva ) sata od uzimanja
- do dostave u laboratorij – urin je „čuvan“ na toplom mjestu (u džepu, „na suncu“ i sl.)
- podrazumijeva urin dobiven kateterom
-
oprati uretralno ušće vodom i
sapunom
- isprati vodom, potom sterilnom fiziološkom otopinom
-
obrisati ušće sterilnim tupferom
- aseptički uvesti kateter u mokraćni mjehur
- pustiti prvi volumen mokraće ( oko 15 cm³ ) - slobodno da „ispere“ eventualne komenzale, Tek tada uzeti urin kao uzorak, u sterilnu posudu (KOMENZALI su bakterije koje koloniziraju (naseljavaju) neko područje, ali ne izazivaju infekciju)
- izbjegavati za uzimanje uzorka urina, jer je trajni kateter obično koloniziran bakterijama i egzo- i endoluminalno
-
dezinficirati kateter 70%-tnim
alkoholom - na sredini između tijela bolesnika i prvog spoja s
drugim dijelom sistema (spojevi
različitih sistema su mjesta koja
su češće od ostalih dijelova tog istog sistema – kolonizirani tj.
naseljeni bakterijama)
- nakon što alkohol ISHLAPI, štrcaljkom i iglom uzeti 5-10 ml urina, te ga aseptički aplicirati u sterilnu posudu (ili ga dostaviti u istoj štrcaljki)
NAJČEŠĆE
GREŠKE:
- uzorak urina je uziman iz vrećice sistema trajnog katetera
- nije provedena dezinfekcija mjesta punkcije katetera
- uzorak iz sistema trajnog katetera izabran je kao dobar uzorak otkrivanja potencijalnog izročnika infekcije
c)
urin
dobiven
suprapubičnom punkcijom
- nakon dezinfekcije kože učiniti punkciju
- urin dobiven punkcijom aseptički aplicirati u sterilnu posudu (ili ga dostaviti u istoj štrcaljki)
- ova vrsta uzorka prilično je zastupljena metoda dobivanja uzorka urina u pedijatrijskoj populaciji. Međutim, ovom metodom ne možemo dobiti, u većini slučajeva, nezagađeni uzorak; nemoguće je izbjeći fiziološku floru distalne uretre, a često je ovaj uzorak zagađen i bakterijama doplavljenim iz anogenitalnog područja. Zato se preporuča :
- oprati spolovilo i cijelo anogenitalno područje vodom i sapunom – nekoliko puta („hiperhigijena“)
- oprano područje osušiti sterilnom gazom (ili dobro izglačanim ručnikom ili izglačanom tekstilnom pelenom)
- na tako pripremljenu, suhu kožu spolovila – zalijepiti vrećicu – ne dodirujući je s unutarnje strane; također – ne dodirivati kožu nakon pranja, a prije ljepljenja vrećice
POHRANA:
URIN
- dobiven bilo kojim
načinom - pohraniti:
< 2 sata: sobna temperatura
> 2 sata: temperatura hladnjaka (+4°C)
NAJČEŠĆE
GREŠKE :
- oprana koža je dodirivana prstima prije ljepljenja vrećice
- vrećica se pokušava zalijepiti na još vlažnu (neosušenu) kožu
- nakon pranja, koža je obrisana neizglačanim ili već upotrebljenim ručnikom
- upozoriti bolesnika da ne smije mokriti prije pretrage minimalno 4 sata, te da izvrši higijenu spolovila vodom i sapunom
- neposredno prije uzimanja obriska, povući prepucij prema tijelu, te ušće uretre očistiti tupferom namočenim sterilnom fiziološkom otopinom
- ukoliko postoji ISCJEDAK – uzeti ga brisom ili direktno kapnuti na predmetno stakalce (sušenje, konzultacija liječnika mikrobiologa). Ovakav obrisak je potrebno ODMAH dostaviti u mikrobiološki laboratorij u ruci, da se spriječi hlađenje ispod tjelesne temperature i da se spriječi sušenje uzorka.
Uputnije je da se ova vrsta uzorka uzima u mikrobiološkom laboratoriju!!!
- namočiti briseve (s tankom pamučnom glavom) sterilnom fiziološkom otopinom (PRVI BRIS – za analizu na mikoplazme (Ureaplasma urealythicum i Mycoplasma hominis), DRUGI BRIS - za analizu na Chlamyidia-u trachomatis, TREĆI BRIS – za analizu prisustva HPV -a)
-
ne dodirujući kožu glansa – uvesti
bris u uretru 2-4 cm duboko i rotirati bris oko 2-3 sekunde.
Efikasno izbrisati
stijenku uretre, da bismo u uzorku dobili
STANICE, jer će se iz ovog uzorka analizirati intra- i epicelularni
mikroorganizmi!
-
za dokazivanje prisutnosti
Trichomonas vaginalis – a u uretri muškarca – najbolji je uzorak
URIN ( PRVI MLAZ!).
Preporuča se uzimanje ovog uzorka u mikrobiološkom laboratoriju,
radi očuvanja vitalnosti
mikroorganizma (urin se ne smije ohladiti ispod temperature
tijela).
- uzorak uzeti prilikom ginekološkog pregleda
-
upozoriti bolesnicu da ne smije
mokriti minimalno 4 sata
- pripremiti briseve s tankom glavom
- namočiti ih sterilnom fiziološkom otopinom, kao i jedan sterilni tupfer
- obrisati ušće uretre sterilnim tupferom i I (prvim) brisom, koji se mora odbaciti!
-
II (drugi bris), pa potom,
III (treći) uvesti u
uretru i rotirajući ih -
efikasno
izbrisati stijenku da
bismo dobili STANICE (analiza intra- i epi-celularnih
mikroorganizama)
POHRANA UZORAKA URETRE:
- uzorci se pohranjuju na temperaturu hladnjaka (+4°C)
- uzorak za MIKOPLAZME (uključuje Ureaplasma-u urealythicum i Mycoplasma-u hominis ) mora se razmutiti u transportnom mediju, koji se potom sprema do dostave u hladnjak
- uzorak za KLAMIDIJE ( imunofluorescentna metoda ) mora se nanijeti (natapkati) na jažicu stakalca „seta za klamidije“ te se nakon sušenja mora preliti tekućinom iz plastične ampule iz seta. Kada se i to osuši, cijeli se set sprema u hladnjak do trenutka dostave.
- uzorak za analizu HPV – a uroniti u odgovarajući transportni medij i pohraniti u zamrzivač do dostave
NAJČEŠĆE GREŠKE:
- obrisak je uzet, a nije prošlo minimalno četiri sata od posljednjeg mokrenja (mlaz mokraće otplavi i potencijalne patogene!)
- obrisak je uzet prenježno (nisu obrisane stanice, a očekuju se epi- i intra- celularni mikroorganizmi)
- bris ja uveden preplitko u uretru (neodgovarajući materijal za analizu)
- prvi obrisak nije odbačen, nego je poslan kao uzorak za analizu (takav obrisak sadrži površinske epitelne stanice i / ili sluz, te je i u jednom i u drugom slučaju onemogućena odgovarajuća analiza)
- preporučljivo je seksualno apstinirati nekoliko dana prije davanja uzorka
- obvezno naglasiti bolesniku da, prije akta uzimanja ejakulata, mokri i izvrši temeljitu higijenu spolovila vodom i sapunom, da se izbjegne zagađenje uzorka bakterijama koje su sastavni dio fiziološke flore distalne uretre i kože spolovila
- ejakulirati u sterilnu bočicu sa širokim otvorom, ne dodirujući prstima unutrašnju stijenku bočice
POHRANA : < 2 sata: sobna temperatura
> 2 sata: temperatura hladnjaka (+4°C)
NAJČEŠĆE GREŠKE:
- nije učinjena prethodna odgovarajuća toaleta
- nije mokrio prije toalete i uzimanja uzorka
- uzorak uzeti prilikom ginekološkog pregleda
- upotrijebiti briseve s debljom pamučnom glavom
- prikazati porciju pomoću spekula
- sterilnim tupferom odstraniti sluz i floru rodnice
- I (prvi) obrisak odbaciti (to je sluz i flora rodnice). Tek potom, sljedećim brisevima, efikasno obrisati endocerviks
-
II (drugi) obrisak uzeti
kao uzorak za eventualnu „bakteriološku analizu“
-
III (treći) obrisak uzeti
kao uzorak za analizu „na mikoplazme“
-
IV (četvrti) obrisak
uzeti kao uzorak za analizu „na klamidiju“ i / ili za analizu „
na HPV “
POHRANA:
- uzorci se pohranjuju na temperaturu hladnjaka (+4°C)
- uzorak za AEROBE i eventualno ANAEROBE uroniti u transportni medij i pohraniti na sobnoj temperaturi, zbog očuvanja vitalnosti anaeroba
- uzorak za MIKOPLAZME (uključuje ureplazmu i mikoplazmu) mora se razmutiti u transportnom mediju, koji se potom sprema do dostave - u hladnjak
- uzorak za KLAMIDIJU ( imunofluorescentna metoda ) mora se nanijeti (natapkati) na jažicu (prozirni dio stakalca) „seta za klamidije“ te se nakon sušenja mora preliti fiksatorom iz plastične ampule iz seta. Kada se to osuši, cijeli se set sprema u hladnjak ( +4°C ) do trenutka dostave.
- uzorak za KLAMIDIJU ( molekularna metoda ) i / ili uzorak za HPV – analizu razmutiti u odgovarajući transportni medij i pohraniti u zamrzivač.
NAJČEŠĆE GREŠKE :
-
nije odstranjena sluz,
sterilnim tupferom i odbačenim prvim obriskom, s mjesta odakle će
se uzeti materijal za analizu
- nije uzorak uzet dovoljno energično, pa nema dovoljno ili nema uopće materijala koji je potreban za uspješnu analizu (lažno negativan nalaz!)
- obrisani materijal nije „natapkan“ na jažicu stakalca seta za klamidije, nego je nehotično raznesen, tj. razmazan na neprozirni dio stakalca
Kod
asimptomatskih bolesnika sa sumnjom na klamidijsku infekciju ili
kod sumnje na kontaktno kliconoštvo, trebalo bi se uzorak obraditi
molekularnom metodom detekcije, jer je metoda daleko
osjetljivija, nego dijagnostika direktnom imunofluorescencijom.
SADRŽAJ
MATERIŠTA
- uzorak tkiva uzeti „zaštićeno“ (dvoluminalnim kateterom)
- aseptički inokulirati u anaerobni transportni sistem (materijal uroniti u transportnu podlogu)
- ukoliko je sadržaj tekuć ili rijedak – inokulirati aseptički u anaerobnu „fan – bočicu“ ( narančasti čep, 5 – 10 cm³ ); ili volumen manji od 5 cm³ inokulirati u „fan – bočicu“ sa žutim čepom – na identičan način kao što se inokulira krv za hemokulturu ( alkoholom dezinficirati gumeni čep „fana“, pričekati da alkohol ishlapi, potom inokulirati sadržaj )
- dijagnostika se svodi na kultivaciju kao i na mikroskopsko pretraživanje tzv.direktnog preparata uzorka na „licu mjesta“ - uz bolesnicu – čime se može evidentirati prisutnost Candida sp., Trichomonas vaginalis – a; prikaz tzv. „clue-stanica“ koje govore u prilog prisustva Gardnerella-e vaginalis ; nalaženje inficiranih leukocita ( PMN - polimorfonukleara ) Gram - negativnim diplokokima ( Neisseria gonorrhoeae ).
- za dokaz N. gonorrhoeae kultivacijom potrebno je materijal inokulirati u poseban transportni sistem (s proizvodnjom CO2) zbog očuvanja vitalnosti gore navedenog mikroorganizma i odmah dostaviti u laboratorij. Uzorak ne pothlađivati ispod temperature tijela.
- kultivacija uzorka za dokaz Trichomonas vaginalis je moguća, ali također prilično zahtjevna. Uzorak se odmah uz bolesnicu mora inokulirati u odgovarajući tekući medij, koji je prethodno zagrijan na temperaturu tijela, te ga tako toplog što prije dostaviti u mikrobiološki laboratorij ( u ruci ili grijaču na 37º C )
- za dokaz prisustva Gardnerella – e vaginalis , ßHS“B“ i Candida – e species uzorak uroniti u „gel – transportni medij“ i pohraniti u hladnjak ( +4° C )
METODE DIJAGNOSTIKE
UZIMANJE UZORAKA - PREPORUKE